HE染色操作步驟

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術裏常用的染色法之一 。蘇木精染液為鹼性 ，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸着紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細胞質和細胞外基質中的成分着紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。

適用範圍

（01）組織學、胚胎學、病理學教學與科研。

he染色實驗具體步驟

（01）取材，固定：固定液——甲醛（福爾馬林）從人或動物新鮮屍體上取下組織塊(一般厚度不超過0．5釐米)投入預先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固，以防止細胞死後的自溶或細菌的分解，從而保持細胞本來的形態結構。

（02）修剪，脱水，透明：脱水劑——酒精透明劑——二甲苯不同組織固定時間不同，固定成功後需要修剪25px*25px*5px，放入包埋盒中，流水沖洗（去除組織中的固定液）30分鐘。至於不同濃度的酒精脱水，一般用由低濃度到高濃度酒精作脱水劑，逐漸脱去組織塊中的水份。再將組織塊置於既溶於酒精，又溶於石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。

（03）浸蠟，包埋：石蠟將已透明的組織塊置於已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保温。待石蠟完全浸入組織塊後進行包埋，冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機上切成很薄的切片。

（04）切片、展片、烤片：將包埋好的蠟塊固定於切片機上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺摺，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恆温箱中烘乾。

（05）脱蠟、至水、染色：脱蠟劑：二甲苯至水劑：酒精染色劑：蘇木精水溶液，酒精伊紅染

色液

（01）染色前，須用二甲苯脱去切片中的石蠟，再經由高濃度到低濃度酒精，最後入蒸餾水，就可染色。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種鹼性染料，可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色，被鹼性染料染色的結構具有嗜鹼性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細胞質染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。

HE染色過程：

（01）將已入蒸餾水後的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘。

（02）酸水及氨水中分色，各數秒鐘。

（03）流水沖洗1小時後入蒸餾水片刻。

（04）入70％和90％酒精中脱水各10分鐘。

（05）入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。

脱水、透明：同2步驟

（01）染色後的切片經純酒精脱水，再經二甲苯使切片透明。

封片

（01）將已透明的切片滴上樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略幹後，貼上標箋，切片標本就可使用。生理鹽水、蒸餾水、PBS實驗必備溶劑,裏面的很多試劑不用親自買，應該有專門做切片和染色的實驗室吧，都是公用的哦！！