蛋白印跡的使用注意事項有哪些

蛋白印跡是很多的試驗器器材中常見的器材之一，很多的需求者想買到便宜的，那麼下面介紹一下蛋白印跡的使用注意事項有哪些：

操作方法

（01）一抗的選擇是影響免疫印跡成敗的主要因素。多株抗體結合抗原能力較強、靈敏度高，但易產生非特異性的背景;單株抗體識別抗原特異性較好，但可能不識別在樣品製備時因變性而失去了空間構型的抗原表位，且易發生交叉反應。因此，兼有多株抗體和單株抗體優點的混合單株抗體近年特別被推薦，它是由一組能與抗原分子中的不同且不易變性的抗原表位結合並不易出現交叉反應的單株抗體混合構成。

（02）使用化學發光檢測時，試劑須按需要量臨用前配置混合。

（03）一般情況使用0.45μm的NC膜，0.1～0.2μm的小孔徑膜只適合於分子量小於20kD的蛋白質。

（04）如果出現非特異性的高背景，可觀察僅用二抗單獨處理轉印膜所產生的背景強度，若高背景確由二抗產生，可適當降低二抗濃度或縮短二抗孵育時間;並考慮延長每一步的清洗時間。

（05）一抗與二抗的稀釋度、作用時間和温度對檢測不同的蛋白要求不同，須經預實驗確定最佳條件。

（06）濾紙/凝膠/轉印膜/濾紙夾層組合中不能存在氣泡，可用玻璃棒在夾層組合上滾動將氣泡趕出，以提高轉膜效率;上下兩層濾紙不能過大，避免導致直接接觸而引起短路。

（07）PVDF尼龍膜較NC膜柔軟、結實、靈敏度高，易於操作且蛋白質結合能力強(PVDF膜可結合蛋白質480μg/cm2，而NC膜只能結合蛋白質80μg /cm2);缺點是PVDF尼龍膜背景也高，需要加強封閉;此外，PVDF尼龍膜若在使用前先行甲醇處理5～10s，以活化膜表面的正電基團，使它更容易與帶負電的蛋白質結合，可提高蛋白質在膜上的保留指數。

（08）如果反應靈敏度不高，可增加凝膠的厚度到1.5mm(厚度超過2.0mm時，凝膠轉移效率受限);也可在電泳條帶不發生變形的前提下，儘量提高蛋白樣品的上樣量。憶立賦一站式採購平台，正品保證，限時折扣。