培養基的製備步驟有哪些

第一，用水

培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。

第二，稱量

稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結果；乾粉培養基易吸潮，如有條件，儘量在濕度較低的房間稱取培養基。

第三，覆水

覆水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長；容器的大小需大於覆水後培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養基溢出；含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘；加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞，並可產生有毒物質，如發現焦化，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基即不能使用，應重新制備。對於瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱，最多隻能加熱兩次，第二次再融化後仍未用完的培養基應棄去。

第四，滅菌

一般培養基採用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃15 min，含糖或特殊培養基，按照國家標準或生產商提供的説明滅菌。已配製好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸鹼度。高温可破壞培養基的營養成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌温度和時間，並且不可重複滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力錶等要定期進行檢定，並定期採用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

第五，pH測定

微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH值，即培養基使用前的pH，並應在25℃温度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/L Na0H或lmol/LHCL調整，注意不可反覆調pH，否則會影響培養基的滲透壓。

第六，配製好的培養基保存

滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需温度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配製的培養基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完，應於冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。