蛋白純化的方法

蛋白純化技術有哪些？蛋白純化技術基本的原理是什麼？今天在這裏以Abbkine的預裝柱、親和層析填料為例做一個簡單的介紹：

操作方法

（01）根據蛋白的特性，一般可以有以下5種純化方法。目前平台配備的主要是前四種層析純化的各種凝膠柱。反相層析技術在一般的蛋白純化中較少使用，下面將詳細介紹常用的前四種層析技術原理及特點。

（02）1.凝膠過濾層析根據大小和形狀分離，這種分離方式是非吸附性的，整個分離過程中只需要一種緩衝液，實驗操作方便。在峯譜圖中，出峯順序是：大分子先流出層析柱，小分子後出。

（03）2.離子交換層析不同蛋白質的等電點（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH緩衝液條件下所帶正/負淨電荷不同，選擇不同的離子交換柱實現分離。離子交換層析屬於吸附性分離方式，純化過程中它具有可逆、操控性強及實現樣品濃縮等特點。在精純實驗中是常與其它方法相結合使用的主要技術。

（04）3.親和層析通過生物分子之間的特異性相互作用來實現分離的層析方法。親和層析具有高選擇性、高純度、快速、濃縮等特點，在重組蛋白的分離中多作為第一步的粗純，實現對絕大部分雜質蛋白的去除。

（05）4.疏水相互作用層析依據生物分子間疏水性差別實現分離的一種層析方式。高離子強度下，增進蛋白質中的疏水性氨基酸與層析介質間的疏水性相互作用，削弱其靜電作用力。洗脱時，降低流動相離子強度，削弱蛋白質分子與層析介質間的疏水作用，實現目的蛋白的純化和收集。

（06）疏水作用層析也屬於吸附性分離方式，對具有疏水特性的目的蛋白具有高選擇性和濃縮等特點。

特別提示

更多的詳細介紹如何運用各種層析技術實現不同蛋白的分離純化知識，敬請期待